乙型肝炎病毒表面大蛋白LHBs在慢性乙型肝炎患者检测中的结果分析

国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第１４期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１４　表３　＞３～６岁组儿童非典型肺炎病原体感染　阳性构成比（　）　岁组和大于３～６岁组，提示昆明地区这２种病原体感染发病　年龄有减小前移的趋势。因此，本地区各级临床医师在对６岁　以下急性下呼吸道感染患儿的诊治过程中，针对非典型症状、　体征的患儿应进行针对性检测并合理用药，避免误诊，使患儿　得到及时救治。　参考文献　［１］Ｃｈｋｈａｉｄｚｅ　Ｉ，Ａｎｊａｖｉｄｚｅ　Ｎ，Ｎｅｍｓａｄｚｅ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｏｇｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｃｕｔｅ　ｒｅｓｐｉｒａｒｏｒｙ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ｉｎ　Ｇｅｏｒｇｉａ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ　Ｐｅｄｉ—　３讨　论　ａｔｒ，２００６。７３（７）：５６９—５７２．　在发展中国家肺炎导致约２１　儿童死亡　，急性下呼吸　道感染是儿科常见病，严重下呼吸道感染多见于５岁以下儿　童　］。近年来流行病学调查显示，肺炎链球菌感染率有所下　Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ　ＪＣ，ｄａ　Ｓｉｌｖａ　ＬＶ，Ｂｕｓｈ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ：ａ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｅｄｉａｔｒ，２００２，７８（Ｓｕｐｐｌ　２）：￥１２９—　１４Ｏ．　Ｐｒｉｎｃｉｐｉ　Ｎ，Ｅｓｐｏｓｉｔｏ　Ｓ，Ｂｌａｓｉ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｐｎｅｕ　ｍｏｎｉａｅ　ａｎｄ　ｃｈｌａｍｙｄｉａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ｗｉｔｈ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ａｃ　降，而非典型肺炎病原体（支原体、嗜肺军团菌、衣原体等）感染　率在不断上升，高达４Ｏ　～６Ｏ　［３］。由于非典型肺炎临床表　现及体征不典型，肺部体征相对轻微且呈多样性，不特异，与其　他病原体引发的呼吸道感染难鉴别，易误诊。因此，临床医师　应根据本地区非典型肺炎病原体流行情况，对就诊患儿有针对　性地进行检测及治疗。　ｑｕｉｒｅｄ　ｌｏｗｅｒ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｔｒａｃｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２００　１，　３２（９）：１２８１－１２８９．　钱新宏，焦西英，成胜权，等．２００６年西安地区儿童肺炎支原体感　染的流行病学分析ＥＪ］．现代检验医学杂志，２００８，２３（５）：６８　６９．　李亚．儿童军团菌肺炎的研究进展［Ｊ］．中国妇幼保健，２００５，２Ｏ　本文资料显示，各年龄组患儿非典型肺炎病原体主要为　ＭＰ和ＬＰ。ＭＰ感染率随年龄增长呈上升趋势，感染年龄主要　集中在１～６岁，与国内报道相符＿４］。ＬＰ感染率也随年龄增长　呈上升趋势，与文献报道相符ｌ＿５］，感染年龄同样集中在１～６　岁。并且二者感染率均有逐年上升趋势。可能与该年龄段儿　童生活环境有关，其主要以群居为主，增加了交叉感染的机会。　既往文献报道［６。Ｊ，ＭＰ与ＬＰ感染集中于６岁以上年长儿　童，经对各年龄组观察发现，ＭＰ与ＬＰ感染集中于大于１～３　・］　］　］　］　（５）：６３４—６３５．　］　　］Ｐｏｒａｔｈ　Ａ，Ｓｃｈｌａｅｆｆｅｒ　Ｆ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ　Ｄ．Ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｃｏｍ—　ｍｕｎｉｔｙ　ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ　ａｍｏｎｇ　ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄ　ａｄｕｌｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ，　１９９７，３４（１）：４卜４８．　王素萍，王俊升，李慧芬，等．儿童散发性军团菌病流行特征的研　究口］．中华流行病学杂志，ｌ９９５，ｌ６（３）：１５０—１５３．　（收稿日期：２０１０　１１－０７）　经验交流・　乙型肝炎病毒表面大蛋白ＬＨＢｓ在慢性　乙型肝炎患者检测中的结果分析　王志东，王　亚，李　颢　（河南省驻马店市汝南县人民医院检验科摘　要：目的４６３３００）　探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｓ基因编码的表面大蛋白（ＬＨＢｓ）对诊断慢性乙型肝炎的临床价值。方法　采用荧　光定量ＰＣＲ方法对４７１例慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶ　ＤＮＡ进行检测，采用ＥＬＩＳＡ法，对上述标本进行ＬＨＢｓ和ＨＢＶ血清标　志物（ＨＢｖｆＭ）模式的检测。结果　不同ＨＢＶ－Ｍ模式的ＨＢＶＤＮＡ与ＬＨＢｓ的检出结果差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），但ＨＢＶ　ＤＮＡ拷贝数与ＬＨＢｓ的表达有良好的相关性。结论指标。　ＬＨＢｓ与ＨＢＶ　ＤＮＡ呈较好的相关性，是一个指示ＨＢＶ复制水平的血清　关键词：肝炎表面抗原，乙型；　乙肝病毒ｓ基因编码的表面大蛋白；　乙型肝炎病毒ＤＮＡ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１ｌ＿１４．０５２　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１１）１４—１６２８—０２　乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在中国人中感染率高，易慢性化而　引起肝硬化和原发性肝癌。ＨＢＶ　Ｓ基因编码合成的ＨＢＶ外　膜蛋白由３种蛋白组成，包括小蛋白、中蛋白和大蛋白。小蛋　白即ＨＢｓＡｇ，中蛋白即ＨＢｓＡｇ和前Ｓ２抗原（ＰｒｅＳ２Ａｇ），ＨＢＶ　Ｓ基因编码的表面大蛋白（ＬＨＢｓ）即ＨＢｓＡｇ、ＰｒｅＳ２Ａｇ和前Ｓ１　型肝炎患者，尤其是肝硬化患者中ＨＢｅＡｇ阴性者高达６ｏ　以　上嘲，评估ＨＢＶ复制的指标主要有ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ，但　是ＨＢｅＡｇ阴性的慢性乙型肝炎患者除ＨＢＶ　ＤＮＡ外，无其他　标志物可反映ＨＢＶ复制程度。本研究旨在探讨将ＬＨＢｓ用　于反映ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ复制程度的可　靠性。　１资料与方法　１．１一般资料　患者血清标本来源于随机抽取本院２００９年　８月至２０１０年７月门诊或住院慢性乙型肝炎患者４７１例，其　中男２９２例，女１７９例；年龄１８～６８岁，平均４ｌ＿３岁。　抗原（ＰｒｅＳ１Ａｇ）。ＬＨＢｓ在空间上具有２种不同的跨膜构象，　作为ＨＢＶ的包膜蛋白，其内侧可以和ＨＢＶ核壳体膜结合，外　侧可与病毒受体结合，是ＨＢＶ颗粒成熟包装的关键ｌ１］。近年　来，随着对ＬＨＢｓ中前ｓ抗原的研究，发现前ｓ区的特有拓扑　结构在ＨＢＶ感染与复制等过程中起重要作用。中国慢性乙　国际检验医学杂志２０１１年９日笠望鲞箜１［１塑ｌｎｔ　兰　堕！壁　竺　！　！：望！　：　１．２方法ＨＢＶ血清标志物（ＨＢＶ—Ｍ）检测试剂盒（深圳康　生宝生物技术有限公司）；ＬＨＢｓ定量检测试剂盒（北京热景生　物技术有限公司）；ＨＢＶ　ＤＮＡ实时荧光ＰＣＲ定量检测试剂盒　（广州达安基因股份有限公司）。操作按试剂盒说明书进行。　１．３统计学处理采用ＳＰＳＳＩＩ．０软件对数据进行分析，率　的比较采用Ｙ　检验，并对ＬＨＢｓ与ＨＢＶ　ＤＮＡ拷贝数进行相　关性分析。　２　结　果　２．１　ＬＨＢｓ阳性率与ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性率的比较检测４７１例　慢性乙型肝炎患者血清，其中ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性３５２例，总阳性　率为７４。７Ｏ　；ＨＢＶ　ＤＮＡ阴性１１９例，其ＨＢＶ－Ｍ为阳性，符　合诊断标准，但检测ＨＢＶ　ＤＮＡ拷贝数低于阳性标准。ＬＨＢｓ　阳性３４８例，总阳性率为７３．９　，与ＨＢＶ　ＤＮＡ总阳性率无明　显差异（Ｐ＞０．０５）。　２．２不同ＨＢＶ－Ｍ模式中ＨＢＶ　ＤＮＡ与ＬＨＢｓ的检测结果比　较不同的ＨＢＶ－Ｍ模式中ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ的检出率不　同，其中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ同时阳性者的ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ　均有较高的阳性率，分别为９１．８６　和８７．５５　，二者阳性率差　异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＨＢｅＡｇ阴性者ＨＢＶ　ＤＮＡ和　ＬＨＢｓ阳性率都较低，分别为５０．００　和５３．２２　，两者差异有　统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），见表１。　表１　ＨＢｖ＿Ｍ不同模式患者ＨＢＶ　ＤＮＡ　与ＬＨＢｓ检出情况　ＨＢＶ　ＤＮＡ（＋）　ＬＨＢｓ（＋）　ＨＢＶ—Ｍ（＋）　［　（　）］　Ｉｎ（　）］　１、２、３　２Ｏ９　１９２（９１．８６）　１８３（８７．５５）　１、２、４　１５７　９０（５７．３２）　１００（６３．６９）　１、２　６２　３１（５０．００）　３３（５３．２２）　１、３　４３　３９（９０．６９）　３２（７４．４１）　合计　４７１　３５２（７４．７０）　３４８（７３．９０）　１：ＨＢｓＡｇ；２：ＨＢｃＡｇ；３：ＨＢｅＡｇ；４：ＨＢｅＡｂ。　２．３　ＨＢｅＡｇ阴性患者中ＬＨＢｓ和ＨＢＶ　ＤＮＡ的相关性　在　ＨＢｅＡｇ阴性但是ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性的１１３例标本中，ＬＨＢｓ阳　性率为８２．２％，在ＨＢｅＡｇ阴性患者中ＬＨＢｓ与ＨＢＶ　ＤＮＡ的　检出符合率为７６．６　，两者具有较好的相关性。　３讨　论　ＨＢＶ形成包膜过程中，ＬＨＢｓ起着关键作用，ＬＨＢｓ前ｓ　区具有拓扑结构，并具有反式激活病毒复制作用，检测ＬＨＢｓ　具有重要意义。以往是通过检测ＬＨＢｓ独有片段ＰｒｅＳ１实现，　但其前Ｓ区具有复杂拓扑结构，导致ＰｒｅＳ１多肽为免疫源的单　抗检出率较低，不能很好地反映ＨＢＶ复制。本研究使用包被　针对构象型前Ｓ区单抗的试剂检测ＬＨＢｓ［３　］。结果表明，　ＬＨＢｓ能反映ＨＢＶ复制情况，４７１例患者中ＬＨＢｓ阳性率和　ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性率无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在ＨＢｅＡｇ阴性患　者中有５．４８　的患者为ＬＨＢｓ阳性而ＨＢＶ　ＤＮＡ阴性，分析　有３个原因＿５剞：（１）由于ＨＢＶ具有变异性倾向，导致基因变　异频繁；（２）含有ＬＨＢｓ的管状颗粒的数量是Ｄａｎｅ颗粒的　１０　０００倍，血液中消退时间也晚于ＨＢＶ　ＤＮＡ；（３）抗病毒药物　只抑制病毒ｃｃｃＤＮＡ再复制，并不抑制已形成的病毒表达蛋　白，即以ＤＮＡ为模板的转录和病毒蛋白的转译表达不受影　响。ＨＢｅＡｇ是ＨＢＶ感染与复制重要的血清学指标，反映了　机体的免疫状态。ＨＢｅＡｇ转阴是急性乙型肝炎有效治疗的监　测指标，但由于ＨＢＶ基因前Ｃ区或ＣＰ区发生变异可以导致　其合成障碍，而ＨＢＶ仍然活跃复制，在较多的ＨＢｅＡｇ阴性慢　性乙型肝炎患者中仍然呈现ＨＢＶ　ＤＮＡ检测阳性的结果，其　转阴并不能排除病毒的复制与传染性。本研究中ＨＢｅＡｇ阴　性的２１９例标本中ＨＢＶ　ＤＮＡ的阳性率是５５．２５　。如果肝　内ｃｃｃＤＮＡ仍然较多存在，则ＬＨＢｓ仍在一段时间内存在，而　血液中ＤＮＡ可能是阴性。由于ＬＨＢｓ具有反式激活作用，　ＬＨＢｓ的残留是否与病毒持续复制或ＨＢＶ慢性持续性感染相　关，需要进行深入的研究。以上分析表明，单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ　的检测结果来进行诊断及判断病情是不够的，它只能较好地反　映机体对ＨＢＶ感染的免疫应答状况，而ＬＨＢｓ监测灵敏度高　且特异性强，更能清楚地反映患者的ＨＢＶ活动程度，真实地　反映ＨＢＶ的感染和复制情况，二者需要辩证地看待，各有所　长，又有着必然的联系，只有将两种方法有机地结合起来，对　ＨＢＶ－Ｍ进行综合分析，才能为临床诊断、治疗方案设计、药物　疗效观察提供可靠的依据。　不同的ＨＢＶ－Ｍ模式中，ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ的阳性率有　不同的表现，ＨＢｅＡｇ阳性者的ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ均有较高　的阳性率，ＨＢｅＡｇ阴性者ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ阳性率都较低。　由此可以说明，ＨＢｅＡｇ的存在与ＨＢＶ的复制程度有密切的　关系　］。但由于ＨＢＶ—Ｍ检查方法的灵敏度、特异性的限制　以及ＨＢＶ为逃避宿主的免疫反应常发生变异，导致其检测结　果失真，出现假阴性。ＨＢｅＡｇ阴性患者ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ　也有一定数值的阳性率，提示ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎患者　中确实有很大部分患者体内仍然存在ＨＢＶ的复制。用ＬＨＢｓ　检测能够反映ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙肝患者体内ＨＢＶ的复制情　况，弥补目前ＨＢＶ－Ｍ检测的不足，也是ＨＢＶ　ＤＮＡ检测的一　个有益补充。而目前临床是否能把ＨＢｅＡｇ阴性作为无病毒　复制的标准还值得探讨，需进一步检测ＨＢＶ　ＤＮＡ和ＬＨＢｓ，　对无条件做基因检测的医院，ＬＨＢｓ的检测是目前较理想的检　测方法。　参考文献　Ｅｌｉ戴利成，王翠妮，何建方，等．血清乙肝病毒外膜大蛋白检测及其　与病毒复制的关系［Ｊ］．中华实验和临床病毒学杂志，２００６，２０　（３）：２３５—２３７．　［２３魏红山，黄玉波，宋淑静，等．ｅ抗原阴性慢性乙型肝炎患者血清表　面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒ＤＮＡ之间的关系［Ｊ］．中华肝　脏病杂志，２００６，１４（７）：５４３—５４４．　［３］陈晓明，杨美芳，薛寒，等．乙型肝炎病毒大蛋白和ＤＮＡ在抗病毒　治疗中的变化［Ｊ］．中华传染病杂志，２００７，２５（７）：４０５—４０７　Ｅ４］孙颖，辛绍杰，雷厉，等．乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定ＨＢＶ　ＤＮＡ复制的意义口］．世界华人消化杂志，２００６，１４（３）：３５４—３５７．　［５］杨廷敏，王桂利，王钢，等．检测乙肝表面抗原大蛋白的临床意义　［Ｊ］．中国医学检验杂志，２００６，７（４）：２４５—２４７．　［６］乐爱平，胡国信．血清乙肝病毒大蛋白在ＨＢｅＡｇ阴性和低水平　ＨＢＶ—ＤＮＡ乙肝患者中的检测意义［Ｊ］．现代免疫学，２００８。２８　（３）：２４４—２４７．　Ｅ７］胡黎娅．前ｓ１抗原与乙肝５项标志物不同模式的相关性分析　【Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１０，３１（６）：６０６—６０７．　Ｅ８］陈书恩，桑沛霞，杜丽伟，等．乙型肝炎病毒大蛋白检测对乙肝诊　断价值探讨［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１０，３１（７）：７３０—７３１．　（收稿日期：２０１０一１０—２２）