1 。称取TMB １７．２mg(固体），加ＤＭＳＯ１ml 溶解 ，然后加醋酸钠缓冲液（０．１ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ５．５）６６ ml，此为底物A
底物B ,取双蒸水100ml，加３０％H2O2 １７微升
使用时A：B 液等体积混匀即可．
称取TMB 20mg(固体），先用无水乙醇10ml 溶解，充分振荡（试剂瓶要干净，干燥），加双蒸水定容到100 ml，此为底物A
底物B ,取1水柠檬酸 2.1g，无水Na2HPO4 2.82g，0.75%的过氧化氢尿素 0.64ml，双蒸水定容至100ml(无须调PH值，应在4.5-5.0范围。
使用时A：B 各取5ml 混匀，可用于一块96孔板显色。
过氧化氢脲比H2O2稳定，不必如H2O2现用现配，都起供氢体的作用。
2
TMB(10mg/5ml无水l乙醇) 0.5ml
底物缓冲液 10ml
0.75%过氧化氢 32ul
底物缓冲液 :
0.2M磷酸氢二钠 25.7ml
0.1M柠檬酸 24.3ml
加蒸馏水 50ml
TMB使用液：
TMB （10mg/5ml，无水乙醇）0.5ml
底物缓冲液 10ml
0.75% H2O2 32 Ul
3.
TMB加入2.5ml无水酒精中,可加热至37℃～40℃直到TMB完全溶解。
将TMB配成1%浓度，4 ℃ 保存半年以内使用。
使用前，用pH5.0磷酸—柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mgTMB）1%TMB液，再按每毫升TMB加入30% H2O21ul混匀后立即使用。
2NH2SO4终止后，450nm测定OD值。
4.
HRP的底物：
A液：0.02%H2O2 ；用0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠，PH4.5～5.0稀释。
B液：TMB-HCl：0.4‰；用50mM柠檬酸钠，浓HCl调PH值为2.8的溶液溶解。
A液，B液各50ul使用。可使用起来显色比较缓慢，OD值较PIERCE的底物稍偏低一点。
5.
1、TMB粉末，溶于N，N－二甲基甲酰胺，配成10mg/mL。
2、底物缓冲液：0.2Mol/LNa2HPO4 25.7mL
0.1Mol/L柠檬酸 24.3mL
水 50mL
3、H2O2
用时 10mg/mL TMB 165uL
底物缓冲液 11mL
H2O2 3.3uL
酶标板中 每孔加100Ul。
6.
1.底物液A：TMB200mg，无水乙醇（或DMSO）100ml,加双蒸水至1000ml。
2.底物B缓冲液（0.1ml/L柠檬酸-0.2ml/L磷酸氢二纳，pH5.0-5.4）:
Na2HPO4 14.60g，柠檬酸9.33g，0.75%过氧化氢尿素6.4ml，加三蒸水至
1000ml，调至pH5.0-5.4
3.将底物液A和底物B按1：1混合即成TMB-过氧化氢尿素应用液。
这种方法简单、方便、节约试剂，同时过氧化氢尿素较过氧化氢稳定，更
能够确保准确性，荐议大家与我共同分享。哦，但是还有一点要注意，一
次不要配太多，A液久置易变色。
7.
Substrate 'Stock' Solution
· 58mg Tetramethylbenzidine (TM
· 5ml DMSO
· Dissolve TMB in DMSO - wear gloves, and use fume cupboard.
· Cover container in tin foil, label as 'toxic'.
· Store at room temperature in toxic cupboard for up to 1 month.
Substrate 'Working' Solution
· 100ml of TMB stock solution per 10ml of substrate buffer.
· 10ml of H2O2 per 10ml of substrate buffer.
8.
1,称取3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）0.08g，加40ml二甲亚砜溶解，加60ml甲醇，混匀，加100ml底物缓冲液在暗处搅拌2小时至溶解，室温静置4小时。
2,取50μL TMB(10 mg TMB溶于1mL二甲基甲酰胺中)溶液+10 mL底物缓冲 液+10μL30%过氧化氢，混均。
9.
底物液
底物：(TMB-H2O2溶液) pH 5.5
底物缓冲液(PH5.0，0.1M 柠檬酸-0.2M Na２HPO４·12H2O):
1.84g Na２HPO４.12H2O和0.47g 柠檬酸，加水到100ml，调节pH值5.0-5.4
或 9.2g Na２HPO４.12H2O和2.35g 柠檬酸，加水到500ml，调节pH值5.0-5.4
50ml 0.75% H２O２ :取30% H２O２ 1.25ml,总体积调整为50ml.
TMB(四甲基联苯胺)使用液: 取200mg TMB溶解于100ml无水乙醇中。-20℃保存。
临用时配：
TMB(2mg／ml无水乙醇) 0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 9.5ml
0.75％H２O２ 42ul
10.
底物显色液A液：
醋酸钠 13.6g
柠檬酸 1.6g
H2O2（30%） 0.3ml
dH2O 500ml
底物显色液B液（避光保存）：
EDTA-Na 0.2g
柠檬酸 0.95g
甘油 50ml
TMB(四甲基联苯胺) （用DMSO溶解为10mg/ml后在加）dH2O 500ml加入A、B液各50微升，37℃显色。
底物显色液A液：
醋酸钠 13.6g
柠檬酸 1.6g
H2O2（30%） 0.3ml
0.2g
dH2O 至500ml
底物显色液B液（避光保存）：
EDTA-Na 0.2g
柠檬酸 0.95g
甘油 50ml
TMB(四甲基联苯胺) dH2O 至 500ml
DMSO溶解为10mg/ml后在加）0.2g
（用
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