细胞活性检测之XTT法操作步骤

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细胞活力检测手段繁多,XTT法脱颖而出</


在生物科学研究中,细胞活力检测是至关重要的一步。除了CCK8和MTT,XTT法作为一种独特的检测工具,以其高效与灵敏的特点在细胞增殖研究中占据一席之地。XTT,全称为2,3-二氯-5-氟-6-偶氮苯并[a]噻唑,通过活细胞线粒体内的脱氢酶作用,转化为水溶性的棕色甲臜产物,反应量直接反映细胞的活性和增殖状态。


操作流程详解</


首先,确保实验材料准备得当:6.6mmol/L预热的XTT溶液需过滤除菌,现用现配;220mmol/L的PMS需在PBS中配制并避光保存。在实验中,将XTT与PMS按照1:1的比例混合,形成XTT/PMS工作液。


操作步骤如下:



刺激细胞增殖反应,将XTT/电子耦合试剂混合后加入细胞培养液,培养一定时间,让细胞充分吸收。
在检测前2小时,每孔加入20μl的XTT/PMS,均匀混匀,继续培养以观察反应进程。
最后,在酶标仪上,以450nm波长测定吸光度,对比655nm的参考波长,得出关键数据。

结果分析与注意事项</


通过计算试验孔OD值与对照孔的比值(SI),我们可以准确评估细胞的增殖活力。但操作中需注意,丝裂原的品质和活性直接影响实验结果,不同品牌可能存在差异,需预先确定最佳刺激量。此外,选择合适的细胞刺激物(如PHA、ConA、LPS、SPA或PWM)对于T细胞和B细胞的增殖反应至关重要。


细胞的活性和浓度需保持在适宜范围,过高或过低均可能影响实验结果。同时,确保培养液无菌且无支原体污染,使用经过灭活补体的小牛血清或自体血清以避免额外的干扰。


总结</


XTT法凭借其简便的操作、高灵敏度和低细胞毒性,成为细胞活力检测的重要工具。通过严谨的实验设计和细致的操作步骤,我们可以准确评估细胞的增殖活力,为科研工作提供有力的数据支持。

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