细胞活性检测之XTT法操作步骤
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细胞活力检测手段繁多，XTT法脱颖而出</
在生物科学研究中，细胞活力检测是至关重要的一步。除了CCK8和MTT，XTT法作为一种独特的检测工具，以其高效与灵敏的特点在细胞增殖研究中占据一席之地。XTT，全称为2,3-二氯-5-氟-6-偶氮苯并[a]噻唑，通过活细胞线粒体内的脱氢酶作用，转化为水溶性的棕色甲臜产物，反应量直接反映细胞的活性和增殖状态。
操作流程详解</
首先，确保实验材料准备得当：6.6mmol/L预热的XTT溶液需过滤除菌，现用现配；220mmol/L的PMS需在PBS中配制并避光保存。在实验中，将XTT与PMS按照1:1的比例混合，形成XTT/PMS工作液。
操作步骤如下：
刺激细胞增殖反应，将XTT/电子耦合试剂混合后加入细胞培养液，培养一定时间，让细胞充分吸收。
在检测前2小时，每孔加入20μl的XTT/PMS，均匀混匀，继续培养以观察反应进程。
最后，在酶标仪上，以450nm波长测定吸光度，对比655nm的参考波长，得出关键数据。
结果分析与注意事项</
通过计算试验孔OD值与对照孔的比值（SI），我们可以准确评估细胞的增殖活力。但操作中需注意，丝裂原的品质和活性直接影响实验结果，不同品牌可能存在差异，需预先确定最佳刺激量。此外，选择合适的细胞刺激物（如PHA、ConA、LPS、SPA或PWM）对于T细胞和B细胞的增殖反应至关重要。
细胞的活性和浓度需保持在适宜范围，过高或过低均可能影响实验结果。同时，确保培养液无菌且无支原体污染，使用经过灭活补体的小牛血清或自体血清以避免额外的干扰。
总结</
XTT法凭借其简便的操作、高灵敏度和低细胞毒性，成为细胞活力检测的重要工具。通过严谨的实验设计和细致的操作步骤，我们可以准确评估细胞的增殖活力，为科研工作提供有力的数据支持。
