荧光定量计算公式

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Ct值的计算公式为Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。其中,n代表扩增反应的循环次数,X0为初始模板量,Ex为扩增效率,N则表示荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。

在荧光定量PCR技术中,Ct值越小,表明起始拷贝数越多。这一特性使得Ct值成为评估样本中目标DNA或RNA拷贝数的重要指标。

为了准确测定样品中的起始拷贝数,通常会使用已知起始拷贝数的标准品,通过荧光定量PCR扩增,绘制出标准曲线。标准曲线的横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标则代表Ct值。

在构建标准曲线时,每增加一个循环次数,荧光信号会根据扩增效率Ex增加。因此,荧光信号达到阈值强度时,对应的产物量N会随起始拷贝数的增加而增加。

利用标准曲线,我们能够直接从Ct值中反推出样品的起始拷贝数。具体而言,只要获得未知样品的Ct值,就可以通过标准曲线上的对应点,计算出样品中的起始拷贝数。

因此,Ct值不仅能够帮助我们快速准确地评估样本中的目标序列拷贝数,还能够在基因表达量、病原体载量检测等方面发挥重要作用。

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