【干货】液相色谱法分离手性药物
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发布时间：2025-01-24 09:42
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时间：2025-01-24 09:55
手性(chirality)是药物科学中一个关键概念，指的是化合物中分子组成和构造完全相同但立体结构不同的化合物，它们互为镜像，无法完全叠合。关注手性药物的原因在于，药物作用的靶分子也是手性的，因此药物分子与靶分子的不对称性必须相匹配，如同手与手套的对应。此外，含有手性因素的化学药物对映体，在人体内的药理活性、代谢过程和毒性存在显著差异。通常情况下，只有一个对映体具有药理作用，而另一个对映体不仅无药理作用，还会产生一定副作用。例如，20世纪60年代的镇静药反应停（thalidomide,沙利度胺）的消旋体用作缓解妊辰反应作用，但在欧洲服用的孕妇中产下海豚状畸形儿，研究表明反应停的右旋体（R型）有镇静作用，而左旋体（S型）具有胚胎毒性和致畸作用。
HPLC法是药物对映体分离和测定最为广泛应用的方法，特别适用于极性强、热稳定性差的手性药物的分析。HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途径：间接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。目前间接法的应用较少，因此主要介绍直接法（CMPA、CSP）。直接法（CMPA、CSP）涉及对映体之一与手性固定相或手性流动相添加剂间发生分子间的三点作用，形成暂时的非对映异构体的结合物质，通过洗脱分离。在手性流动相添加剂（CMPA）法中，常用的手性流动相添加剂有环糊精（Cyclodextrins）类（主要是α-、β-和γ-环糊精及其衍生物）、手性离子对配合剂（Chiral Ion Pair Complex,CIPC）如（+）-10-樟脑磺酸、奎宁和奎尼丁等，以及配位体交换型手性流动相添加剂（Chiral Ligand-exchange Complexs, CLEC)。
手性固定相（CSP）法具有广泛的应用，优点包括能广泛适用于各类化合物，适于常规及生物样品的分析测定；无需高光学纯度试剂，样品处理步骤简单；制备分离方便，定量分析的可靠性较高。但缺点包括有时需要柱前衍生（但不一定是手性衍生化试剂），对样品结构有一定，其适用性不如普通HPLC固定相（包括正相和反相）那样广泛。到目前为止，CSP柱商品已有40多种，价格大多昂贵，尚未有一种具有类似ODS柱的普遍适用性。
广州研创的手性色谱柱在手性拆分性能、手性柱耐用性方面拥有优越的性能。研创的环糊精类手性柱对含苯基、萘基的化合物有良好的分离效果，对金属络合物、强酸性化合物方面有特色。多糖衍生物类手性柱对含酰胺基、芳香环取代基、羰基、硝基、磺酰基、氰基、羟基、氨基等基团化合物，以及氨基酸衍生物等有优异的分离效果。研创还研发了一系列特种手性柱，如牛血清蛋白柱等。选择合适的CSP柱非常重要，尤其要考虑温度的影响，低温能增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。流动相添加剂的使用需考虑样品的酸碱性，酸性化合物推荐使用TFA、乙酸、甲酸，碱性化合物则使用DEA、乙醇胺、丁醇胺。加入量通常为0.1％-0.2％，不超过0.5％。合适的PH范围为2.0-7.0。样品溶解性需控制在0.5mg/ml—1.0mg/ml，对于酸性化合物和碱性盐，可加入添加剂增加溶解性。若仍不好溶，可溶于100％醇（甲醇、乙醇、异丙醇），若流动相中有烷烃则不可用乙腈。水溶性化合物最好使用反相柱，如OD-R、OD-RH、OJ-RH、AD-RH、AS-RH，流动相可选择醇-水、乙腈-水。
HPLC法中，若遇到柱子压力过高的问题，可能是杂质堵塞了柱头（frit）。解决方法包括更换在线过滤器（in-line filter)或保护柱，或在注射前过滤样品。对于乙醇、异丙醇粘度大的情况，可能需要降低流速直至达到容许的上限。保护柱用于保护分析或半制备柱子免受易于在固定相上吸附或溶化填料的物质的损坏，保护柱材料与柱子相同。更换保护柱的情况包括失去分离作用、峰宽增加、脱尾、增加体系压力降等。
